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操作流程:
1、您收到母细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)换用新鲜完全培养基继续培养。
服务流程:
(1)客户提供:目的细胞具体信息;
(2)操作过程:细胞复苏培养,细胞发货;
(3)交付内容:细胞系/细胞株,以及细胞使用说明书。
产品名称 |
主动脉血管平滑肌细胞 |
规格 |
详见说明书 |
货号 |
BH-0110712 |
英文简称: T/G HAVSMC 细胞
产品名称:主动脉血管平滑肌细胞
规格:主动脉血管平滑肌细胞
形态特性:DMEM
生长特性:贴壁
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
实验要点及说明 :
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制,
7. 因为细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
50次 柱式血液DNAout Column Blood DNAOUT 常温 500U 丁酰胆碱酯酶 Cholinesterase, Butyryl 4℃保存
200次 柱式血液DNAout Column Blood DNAOUT 常温 1g 糜蛋白酶原 Chymotrypsinogen 4℃保存
100次 磁珠血液DNAout MAG Blood DNAOUT 磁珠4℃保存,蛋白酶K溶液-20℃保存(勿反复冻融)
1mg 梭蛋白酶 Clostripain 4℃保存
50次 柱式血液DNA-RNAout Column Blood DNA-RNAOUT 4℃保存 100mg 胶原酶Ⅰ型 Collagenase TypeⅠ 4℃保存
50次 柱式血清血浆DNAout 100mg 胶原酶Ⅱ型 Collagenase Type Ⅱ 4℃保存
100次 血液保存和DNA纯化套装 Blood DNAlocker-DNAOUT Pack 常温 100mg 胶原酶Ⅲ型 Collagenase Type Ⅲ 4℃保存
4次 大提柱式血液DNAout Maxi Column Blood DNAOUT 常温 100mg 胶原酶Ⅳ型 Collagenase Type Ⅳ 4℃保存
10次 百万碱基级血液DNAout 80KU DNA 酶,Ⅱ型 Deoxyribonuclease Ⅱ(Porcine Spleen) -20℃保存
10次 Southern级血液DNAout 1KU 心肌黄酶 Diaphorase 4℃避光保存
1次 96孔板血液DNAout(真空法) 96 Microwell Plate Blood DNAOUT 常温 25mg 弹性蛋白酶 ( 猪胰 ) Elastase From Porcine Pancreas 4℃保存
5次 96孔板血液DNAout(真空法) 96 Microwell Plate Blood DNAOUT 常温 150U 半乳糖氧化酶 Galactose Oxidase -20℃保存
1次 97孔板血液DNAout(离心) 5KU β- 半乳糖苷酶 Galactosidase,Beta 4℃保存
30次 凝固血液DNAout Blood Clot DNAOUT 常温 2.5KU 己糖激酶 Hexokinase 4℃保存
主动脉血管平滑肌细胞Madurella mycetomatis足马杜拉分枝LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Tai Forest Ebola Virus(TAFV)大森林埃博拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
水牛源性成分PCR检测试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Polyporus猪苓染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
虎源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Rhizoma zingiberis recens生姜LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Sabia Virus(SABV)萨比亚病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Culicoides spp.库蠓通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Giardia spp.贾第虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Radix ephedrae麻黄根LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Pseudobulbus cremastrae seu pleiones山慈菇PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Piscirickettsia salmonis鲑鱼立克次氏体LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Heterakis isolonche自然感染雉异刺线虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周