咨询电话：18117197628
细胞接收后的处理：
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
英文简称
规格
货号
MDA-MB-468:MDAMB468
1×106
P-X847
产品详情：
生长特性
贴壁细胞
细胞形态
上皮细胞样
生长培养基 Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，100%
温度：37℃
推荐传代比例 1:2-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 1、该细胞推荐使用Leibovitz's L-15培养基进行培养，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，会产生细胞毒性； 2、如您没有无二氧化碳的培养箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培养基时即可正常通入5%二氧化碳； 3、配套专用培养基默认Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，请联系销售下单备注更改。 4、该细胞培养过程中会分泌少量黑色颗粒物，不影响细胞生长，属正常现象。
背景描述 MDA-MB-468细胞是由Cailleau·R等人于1977年从一位患有转移性乳腺癌的51岁黑人女性的胸腔积液中分离得到的。虽然供体组织的G6PD等位基因杂合，但MDA-MB-468细胞始终表现为G6PD A表型。p53MDA-MB-468细胞是由Cailleau·R等人于1977年从一位患有转移性乳腺癌的51岁黑人女性的胸腔积液中分离得到的。虽然供体组织的G6PD等位基因杂合，但MDA-MB-468细胞始终表现为G6PD A表型。p53基因273位密码子存在G→A突变，从而导致Arg→His替代。每个MDA-MB-468细胞上存在1×10^6个EGF受体。
年龄（性别）
女性，51岁
组织来源
乳腺；；腺癌
细胞类型
肿瘤细胞
肿瘤类型
乳腺癌细胞
生物等级 1
倍增时间 ~36-62小时
致瘤性 Yes, in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7
cells.(Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5).)
受体表达情况 epidermal growth factor (EGF); transforming growth factor alpha
(TGF alpha)
抗原表达情况 Blood Type AB; HLA Aw23, Aw30, B27, Bw35, Cw2, Cw4 (patient)
保藏机构 ATCC; HTB-132 DSMZ; ACC-738
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10?~1×10?个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10?~1×10?个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
|
人类缺陷病毒2型/2型艾滋病病毒gp36抗体 |
猴精氨酸酶1(ARG1)elisa分析检测试剂盒 |
|
HIV2 gp36 |
小鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)elisa检测试剂盒 |
|
溶血磷脂?；泼?span>5抗体 |
UbELISAKit |
|
AGPAT5 |
人泛素蛋白(Ub)elisa分析检测试剂盒 |
|
大鼠波形蛋白(VIM)elisa检测试剂盒免费代测 |
ARG1 ELISA Kit |
|
冰冻切片碱性磷酸酶活性染色试剂盒 |
MOCS2 |
|
人白介素1β(IL-1β)elisa检测试剂盒免费代测 |
1号染色体开放阅读框83抗体 |
|
钼辅因子合成蛋白2抗体 |
C1orf83 |
|
Cy3标记的兔抗猪IgG H&L |
瞬时受体电位离子通道蛋白7抗体（M亚家族） Anti-TRPM7 |
|
Rabbit Anti-Pig IgG H&L / Cy3 |
Ras-GTP酶激活蛋白3抗体 Anti-RASA3 |
|
产气荚膜梭菌(魏氏梭菌)磷脂酶C抗体 |
富含亮氨酸重复结构域蛋白10抗体 Anti-NLRP10 |
|
phospholipasae C |
丝氨酸/苏氨酸特定蛋白磷酸酶抗体 Anti-VHR/DUSP3 |
|
人阿立新A(Orexin A)elisa分析检测试剂盒 |
猪儿茶酚胺(CA)elisa分析检测试剂盒 |
|
HumanOrexinAELISAKit |
MDA-MB-468人乳腺癌细胞CAELISAKit |
|
大鼠谷胱甘肽(GSH)elisa分析检测试剂盒 |
豚鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)elisa分析检测试剂盒 |
|
GSH ELISA Kit |
ECPELISAKit |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。