干冰运输及复苏好存活细胞

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

HBE135-E6E7人支气管上皮细胞

英文名称	HBE135-E6E7:HBE135E6E7	产品形态	上皮细胞样；卵圆形 贴壁细胞
货号	P-X725	产品分类	人细胞系
规格	1×106	包装	株
来源	肺；支气管	用途	仅供科研研究使用

细胞特性：

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 上皮细胞样；卵圆形

冻存条件

冻存液：55%DM/F12+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养方案A（默认）

生长培养基:

HBE135-E6E7 细胞专用培养基

培养条件:

气相：空气，95%；CO2，5%, 温度：37℃

推荐传代比例 1:3-1:4

推荐换液频率 2-3次/周

参考资料(来源文献)

背景描述 The HBE135-E6E7 cell line was derived from normal bronchial epithelium taken from a man undergoing lobectomy for squamous cell carcinoma. Cells from the primary explant in their first passage were infected with the recombinant retrovirus LXSN16E6E7 containing the human papilloma virus (HPV) E6E7 gene. Cells were selected in the presence of 0.4 mg/mL G418

年龄（性别） 男性,；54岁

组织来源 肺；支气管

细胞类型 转化细胞系

生物等级 BSL-2

倍增时间 24-30 hours

保藏机构 ATCC; CRL-2741

细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。                      
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二、细胞培养操作:

1) 复苏细胞：将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 4 mL 培养基混 合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min，弃去上清液，加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有 细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜 (或将细胞悬液加入 6 cm 皿中，加入约 4 mL 培养基，培养过夜) 。天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去 消化液，将培养瓶置于 37℃培养箱中消化 1 -3min (视细胞消化情况而定) ，然后在显微镜下 观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。        。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm 条件下离心 4 min，弃去上清液， 用 PBS 清洗一遍，弃尽 PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度 5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻 存管冻存 1mL 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的产品：

猴前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)elisa分析检测试剂盒	干扰素alpha诱导蛋白6抗体
PCSK9 ELISA kit	小鼠雌二醇(E2)elisa分析检测试剂盒
人非甲基化寡核苷酸(NON)elisa分析检测试剂盒	BRD4/CAP
NONELISAKit	染色体相关蛋白CAP抗体
大鼠c-fos elisa检测试剂盒免费代测	IFI6
M. tuberculosis RFLP基因分析试剂盒	Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363)
人B细胞活化因子（BAFF）elisa检测试剂盒	热休克因子蛋白4抗体
磷酸化D型受体抗体	HSF4
Cy5标记的羊抗小鼠IgM	CD134抗体  Anti-TNFRSF4/OX40/CD134
Goat Anti-Mouse IgM / Cy5	G蛋白偶联嘌呤受体p2y9抗体  Anti-P2Y9
FLJ37543蛋白抗体	原钙粘蛋白13抗体  Anti-PCDHB13
FLJ37543	唾液酸结合球蛋白样凝集素9抗体  Anti-SIGLEC9
犬肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)elisa分析检测试剂盒	小鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa分析检测试剂盒
HCⅡELISA Kit	HBE135-E6E7人支气管上皮细胞AFPELISAKit
大鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)elisa分析检测试剂盒	人富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61/CCN1)elisa分析检测试剂盒
CTX-Ⅰ ELISA Kit	HumanCyr61/CCN1ELISAKit

三、培养注意事项:

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。 
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。 
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。 
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。 
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。 
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 
7. 该细胞仅供科研使用。 
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 1：2 传代 。 
9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。