干冰运输及复苏好存活细胞

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

EA.hy926人脐静脉细胞融合细胞

英文名称	EA.hy926:EAhy926	产品形态	上皮细胞样 贴壁细胞
货号	P-X707	产品分类	人细胞系
规格	1×106	包装	株
来源	脐静脉/体细胞杂交	用途	仅供科研研究使用

细胞特性：

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 上皮细胞样

生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

推荐传代比例 1:3-1:4

推荐换液频率 2~3次/周

背景描述 EA.hy926细胞是在PEG胁迫下，将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫niao嘌呤的A549克隆株融合，构建的一株人脐静脉细胞株。融合子在HAT培养基上生长，并以Ⅷ因子相关抗原筛选，EA.hy926细胞已经过100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示，Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器，分化的内皮细胞特性如血管**，体内平衡-血栓形成，血压及炎症反应。

组织来源 脐静脉/体细胞杂交

细胞类型 杂交瘤细胞

生物等级 1

倍增时间 ~12-24 hours

抗原表达情况 Factor VIII-related antigen; Homo sapiens, expressed

基因表达情况 Factor VIII-related antigen; Homo sapiens.

保藏机构 ATCC; CRL-2922

细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。                      
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二、细胞培养操作:

1) 复苏细胞：将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 4 mL 培养基混 合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min，弃去上清液，加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有 细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜 (或将细胞悬液加入 6 cm 皿中，加入约 4 mL 培养基，培养过夜) 。天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去 消化液，将培养瓶置于 37℃培养箱中消化 1 -3min (视细胞消化情况而定) ，然后在显微镜下 观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。        。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm 条件下离心 4 min，弃去上清液， 用 PBS 清洗一遍，弃尽 PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度 5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻 存管冻存 1mL 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的产品：

胰岛素生长因子样家族成员1抗体	LOC83459蛋白抗体
IGFL1	痉挛性截瘫相关蛋白21抗体  Anti-SPG21
17号染色体开放阅读框104抗体	CYB561D1
C17orf104	细胞色素B561结构域蛋白1抗体
磷酸化Runx3抗体  Anti-phospho-RUNX3(Ser338)	LOC83459
G蛋白偶联受体66/神经调节肽U受体1抗体  Anti-NMUR1/GPR66	SPAG11A
锌指蛋白843抗体  Anti-ZNF843	14号染色体开放阅读框抗体
精子相关抗原11A抗体	MAPK1IP1L/C14orf32
FITC标记的小鼠IgM	5-羟色胺受体3D抗体  Anti-5HT3D Receptor
Mouse IgM / FITC	原钙粘蛋白γC5抗体  Anti-PCDHGC5
G蛋白偶联受体8抗体	泛素连接酶抗体  Anti-PIRH2
GPCR GPR8	转移生长因子β受体1抗体（TGF-βRⅠ，TGFβRⅠ）  Anti-TGF Beta R1/TGFBR1
大鼠抗血小板抗体(IgM)elisa分析检测试剂盒	小鼠S100-B蛋白(S100B)elisa分析检测试剂盒
Rat platelet antibody IgM ELISA kit	EA.hy926人脐静脉细胞融合细胞S100BELISAkit
鲨鱼三碘甲状腺原氨酸(T3)elisa分析检测试剂盒	人白介素37(IL-37)elisa分析检测试剂盒
T3 ELISA Kit	HumanIL-37ELISAKit

三、培养注意事项:

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。 
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。 
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。 
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。 
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。 
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 
7. 该细胞仅供科研使用。 
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 1：2 传代 。 
9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。