主营产品：
生化试剂，标准品,对照品，PCR试剂盒，?核酸检测试剂盒，荧光定量检测试剂盒，生化试剂盒?，比色法试剂盒，酶活性检测试剂盒，ELISA试剂盒，酶联免yi检测试剂盒，试剂盒，ELISA试剂盒，抗体，重组蛋白，分光光度法检测试剂盒，细胞株，原代细胞，细胞培养基，标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
咨询电话：18117197628
新闻详情
引物对反转录实验的影响
日期：2024-08-28 01:54
浏览次数：735
摘要：
引物对反转录实验的影响：
1、 Oligo(dT)
Oligo(dT)引物是约12-18个多聚胸腺嘧啶T组成的重复寡核苷酸序列，能够特异性地与真核生物mRNA的ploy(A)尾退火，故不适合缺少ploy(A)尾结构的RNA，如原核生物RNA或microRNA，也不适用于已降解的RNA，如FFPE样品中RNA。
真核生物中mRNA仅占总RNA的1%-5%左右，通常在进行从真核生物中构建cDNA文库，或者克隆全长cDNA以及3’RACE等研究时会优先选择 Oligo(dT)引物。
对于复杂模板RNA，如含较多二级结构，在进行cDNA的合成延伸过程中，当延伸到二级结构...
引物对反转录实验的影响：
1、 Oligo(dT)
Oligo(dT)引物是约12-18个多聚胸腺嘧啶T组成的重复寡核苷酸序列，能够特异性地与真核生物mRNA的ploy(A)尾退火，故不适合缺少ploy(A)尾结构的RNA，如原核生物RNA或microRNA，也不适用于已降解的RNA，如FFPE样品中RNA。
真核生物中mRNA仅占总RNA的1%-5%左右，通常在进行从真核生物中构建cDNA文库，或者克隆全长cDNA以及3’RACE等研究时会优先选择 Oligo(dT)引物。
对于复杂模板RNA，如含较多二级结构，在进行cDNA的合成延伸过程中，当延伸到二级结构处时，可能会造成延伸终止，若选择Oligo(dT)可能会造成mRNA 5’端信息的丢失。
2、 Random N6-N9
随机引物是由随机碱基组成的寡核苷酸，通常由6个核苷酸组成，称为随机6聚体。该种引物不具备特异性，rRNA, tRNA,非编码RNA，小RNA，降解RNA，复杂二级结构的RNA等都可以作为其模板。该类引物可提高cDNA的产量和浓度，但是会使合成的cDNA长度变短。
3、 基因特异性引物
基因特异性引物能够与模板特异性互补，产生目标性很强的cDNA，对于后续的PCR扩增更特异，适用于已知目的序列。通常应用于一步RT-PCR反应。当使用基因特异性引物（GSP）无法有效合成**链cDNA时，可选用Oligo(dT)或随机引物。