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PCR反应污染原因与对策

日期:2024-08-28 02:17
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摘要: PCR反应的特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 污染原因: 1、标本间交叉污染: 标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。 2、PCR试剂的污染: 主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核...

  PCR反应的特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。

污染原因:

1、标本间交叉污染:

标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。

2、PCR试剂的污染:

主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.

3、PCR扩增产物污染:

这是PCR反应中主要常见的污染问题,因为PCR产物拷贝量 大(一般为1013拷贝/ml),远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。

还有一种容易忽视,可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗??珊?/span>48000拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.

4、实验室中克隆质粒的污染:

在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室,这个问题也比较常见。因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力,其污染可能性也很大。

污染的监测:

一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。