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PCR 与RT—PCR的概念及原理

日期:2024-08-27 17:12
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摘要: 聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的*大特点是能将微量的DNA大幅增加。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。 原理是提取组织或细胞中的总RNA或者mRNA,在反转录酶的作用下将RNA或者mRNA反转录成cDNA,再以该cDNA**链为模...



聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的*大特点是能将微量的DNA大幅增加。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

 

RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。

原理是提取组织或细胞中的总RNA或者mRNA,在反转录酶的作用下将RNA或者mRNA反转录成cDNA,再以该cDNA**链为模板进行PCR扩增,根据靶基因设计用于PCR扩增的基因特异的上下游引物,基因特异的上游引物与cDNA*1链退火,在Taq DNA聚合酶作用下合成cDNA第2链。再以cDNA**链和第2链为模板,用基因特异的上下游引物PCR扩增获得大量的cDNA。


Real-time PCR(实时荧光定量PCR)也可以缩写为RT—PCR,此外还有一个qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR ),有人可能将这三者搞混。

其实Rea-ltime-PCR和 qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR )都是指实时定量PCR,即在PCR进行的同时,对其过程进行实时监测,可以对起始模板数量进行**的分析。并且国际上的约定俗成的是:RT-PCR特指反转录PCR,而Real-time PCR一般缩写为 qPCR(quantitative real-time PCR)。

RT-PCR的方法已经广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。