操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

我司主营产品之一，产品皆严格按照相关标准进行生产，并经过了严格地反复地检测，我们以严谨的态度保证产品的质量，从而保证您的实验顺利进行。产品供货周期短，供货及时，且我司还提供完整的售前和售后服务。本公司产品仅用于科研。

试剂配制:

1、酶联板assay plate ：一块96孔或者48孔。
2、标准品standard：2瓶冻干品。
3、样品稀释液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根过氧化物酶标记亲和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液wash buffer：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

试剂准备：
1. 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。
2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。

样本实验前准备：
ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
（5）培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（6）组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

注意事项：

1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜及洁净塑料容器。
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。
F9(小鼠畸胎瘤细胞)cECL Western Blot Kit/低背景化学发光检测试剂盒

腺细胞英文名称：MDA-MB-231

内膜上皮细胞完全培养基100mL

苜蓿中华根瘤 Sinorhizobium meliloti鞘氨醇杆属 Sphingobacterium sp.

BC-020(腺细胞)5×106cells/瓶×2

灰色困难链霉 Streptomyces griseodifficilis家猫皮肤成纤维样细胞

U-2 OS(骨肉瘤细胞)5×106cells/瓶×2

豇豆慢生根瘤 Bradyrhizobium vigna马杜拉放线 Actinomadura sp.

肺英文名称：Lewis瘤

H22(小鼠肝细胞)5×106cells/瓶×2

PIEC(猪髋动脉内皮细胞 )大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum5-Aminolevulinic Acid （hydrochloride） （1 g）5-ALA|δ-Aminolevulinic Acid； 5-amino-4-oxo-pentanoic acid, monohydrochloride

Small-Molecule Enhancer of Rapamycin-28；6-Bromo-4-allylaminoquinazolineSMER28

R-Palmitoyl-（1-methyl） Ethanolamide （500 mg）N-（2-hydroxy-1R-methylethyl）-hexadecanamide； R-1 PMA； R-Palmitoyl-（1-methyl） Ethanolamide

Palmitoyl thio-PC (50 mg)Palmitoyl thio-PC, 1-O-hexadecanoyl-2-thio-R-(hexadecanoyl)-sn-glycerol-3-phosphocholine

Anatabine （tartrate） （10 mg）1，2，3，6-tetrahydro-2，3’-bipyridine 2，3-dihydroxysuccinate； Anatabine （tartrate）

（±）11-HEDE （25 ug）（±）-11-hydroxy-12E，14Z-eicosadienoic acid； （±）11-HEDE

Bleomycin （sulfate） （50 mg）bleomycin sulfate （salt）； Blenoxane； Bleomycin （sulfate）

Darapladib （5 mg）SB 480848； N-[2-（diethylamino）ethyl]-2-[[（4-fluorophenyl）methyl]thio]-4,5,6,7-tetrahydro-4-oxo-N-[[4’-（trifluoromethyl）[1,1’-biphenyl]-4-yl]methyl]-1H-cyclopentapyrimidine-1-acetamide

KRX-0402peifosine （KRX-0401）

AV-Ceramide （25 mg）（11E）-12-（9-anthracenyl）-N-[（1S，2R，3E）-2-hydroxy-1-（hydroxymethyl）-3-heptadecen-1-yl]-11-dodecenamide； Anthrylvinyl-Ceramide； AV-Ceramide

Protein G SepharoseProtein G Sepharose

Sodium Chloride Solution （NaCl）Sodium Chloride Solution （NaCl）

小鼠高铁血红蛋白还原酶(MHBR)ELISA试剂盒酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae黑绿木霉

猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒 英文名称：Procine hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA Kit规格:96T/48T丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)ELISA Kit，48T/96T

香菇 Lentinula edodes食道组织来源细胞

猪可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒英文名称：Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit规格:96T/48T肺癌标志物DR-70(DR-70TM)ELISA Kit，48T/96T

胎盘绒毛细胞SKOV3 [SK-OV-3], 卵巢腺细胞系

猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒英文名称：Porcine Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA Kit规格:96T/48T补体片断3b(C3b)ELISA Kit，48T/96T

Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞屎肠球 Enterococcus faecium

鸡肌红蛋白(MYO/MB) ELISA试剂盒英文名称：Chicken Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit 规格:96T/48T花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA Kit，48T/96T

中慢生华癸根瘤 Mesorhizobium huakuii香菇 Lentinula edodes

兔粒细胞集落激因子(G-CSF)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit 规格:96T/48T异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA Kit，48T/96T

WI38/VA13(SV-40Z转化肺成纤维细胞)Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)

兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA Kit规格:96T/48T真胰岛素(TI)ELISA Kit，48T/96T