运输和保存：

干冰运输及复苏好存活细胞

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

NCI-H596人非小细胞肺癌细胞

英文名称	NCI-H596	产品形态	上皮细胞样 贴壁生长
货号	P-X9107	产品分类	人
规格	1×106	包装	株
来源	肺	用途	仅供科研研究使用

细胞特性：

种属来源；人

组织来源；肺

性别年龄；73岁，男性

生长特性；贴壁生长

细胞形态；上皮细胞样

细胞规格；1 X 106cells/T25或1 mL冻存管

培养条件；RPMI1640 +10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

冻存条件；90% FBS + 10% DMSO

传代方法；1:3传代, 2-3天传1代

细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。                      
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二、细胞培养操作:

1) 复苏细胞：将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 4 mL 培养基混 合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min，弃去上清液，加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有 细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜 (或将细胞悬液加入 6 cm 皿中，加入约 4 mL 培养基，培养过夜) 。天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去 消化液，将培养瓶置于 37℃培养箱中消化 1 -3min (视细胞消化情况而定) ，然后在显微镜下 观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。        。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm 条件下离心 4 min，弃去上清液， 用 PBS 清洗一遍，弃尽 PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度 5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻 存管冻存 1mL 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的产品：

钾离子通道蛋白17抗体	组织EPHA1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
KCNK17	小鼠肌酸激酶工酶MB(CK-MB)elisa检测试剂盒
G蛋白偶联受体ARHGEF18抗体	McCoy’s 5A培养基 500ml
ARHGEF18	马结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)elisa检测试剂盒
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SIK1抗体  Anti-Snf1lk/SIK1	寡核苷酸探针非位素AP－BCIP/NBT法DNA南方杂交印迹试剂盒
视黄酸受体应答蛋白3抗体  Anti-Rarres3/TIG3	绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体 JSRV-ENV
核孔蛋白Nup37抗体  Anti-NUP37	囊泡相关膜蛋白8抗体 VAMP8
锌指蛋白219抗体  Anti-ZFP219	FCP1蛋白抗体 FCP1
凋亡细胞受体抗体 JMJD6	FITC标记小鼠CD45R单克隆抗体 mouse CD45R/B220/FITC
碳酸酐酶13抗体 CA13	血管内皮生长因子单克隆抗体 VEGF165
源盒蛋白D1抗体 HOXD1	岩藻糖1磷酸鸟苷酰转移酶抗体 FPGT
RAG1激活蛋白1抗体 RAG1AP1	蛋白酶体PSMβ3抗体 Proteasome 20S beta 3
Rho结合蛋白2抗体 Rhophilin 2	6号染色体开放阅读框154抗体 C6ORF154
2号染色体开放阅读框76抗体 C2orf76	NCI-H596人非小细胞肺癌细胞基质金属蛋白酶18/19抗体 MMP19
间变型瘤激酶抗体 ALK	通用型野油菜黄单胞菌菜豆疫病致病变种（Xanthomonas campestris pv.pelargonii；Xcp）基因检测试剂盒
小鼠α1干扰素(IFN-α1)elisa检测试剂盒	/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒

三、培养注意事项:

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。 
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。 
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。 
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。 
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。 
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 
7. 该细胞仅供科研使用。 
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 1：2 传代 。 
9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。