咨询电话:18117197628
服务流程:
(1)客户提供:目的细胞具体信息;
(2)操作过程:细胞复苏培养,细胞发货;
(3)交付内容:细胞系/细胞株,以及细胞使用说明书。
产品名称 |
冠状动脉内皮细胞 |
规格 |
详见说明书 |
货号 |
BH-0110650 |
英文简称:HCAEC 细胞
产品名称:冠状动脉内皮细胞
规格:冠状动脉;内皮细胞
形态特性:DMEM
生长特性:贴壁
特征特性:
培养条件:
传代方法:
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
实验要点及说明 :
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为玻璃**,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制,
7. 因为细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
地黄苷A Rehmannioside A 81720-05-0 10mg 100μL Doxorubicin( Adriamycin )阿霉素 Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
地黄苷D Rehmannioside D 81720-08-3 20mg 100μL Etoposide(依托泊苷/鬼臼乙叉苷) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
豆甾醇葡萄糖苷 Stigmasterol glucoside 19716-26-8 5mg 1 mg Forskolin(腺苷酸环化酶激活剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
烟花苷 Nicotiflorin 17650-84-9 5mg 25 mg Genistein(酪氨酸蛋白激酶抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
罗汉果黄素 Grosvenorine 156980-60-8 5mg 5 g Glucosamine (胰岛素抵抗诱导剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
林生续断苷I (97%) Sylvestroside I 71431-22-6 5mg 1 g GSH(抗氧化剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
连翘脂素 phylligenin 487-39-8 20mg 5 mg H-89 . 2HCL(PKA抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
2'-O-甲基苦参酮 Kurarinone 270249-38-2 5mg 1 mg H-89(PKA抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
鸦胆苦素E bruceine E 21586-90-3 5mg 1 g HDAC抑制剂 Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
二氢卟吩e6 (90%) Chlorin e6 19660-77-6 10mg 1 g Hemoglobin(NO剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
去甲丁香色原酮 Noreugenin 1013-69-0 10mg 18 mg Insulin Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
8-香叶草氧基补骨脂素 8-Geranyloxypsoralen 7437-55-0 10mg 250 nmol Ionomycin(钙离子载体) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
1-氧乙酰旋覆花内酯 1-O-acetyl Britannilactone 681457-46-5 10mg 50μg KT5823(PKG抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
冠状动脉内皮细胞Trichinella nativa乡土旋毛虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Enterovirus type 70(EV70)肠道病毒70型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Rhizoma imperatae白茅根LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Avian Herpesvirus(Gallid Herpesvirus、GaHV)禽疱疹病毒通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
榛子源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Canine Adenovirus (CAV)犬腺病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Enterocytozoon bieneusi 比氏肠微孢虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Paracoccidioides brasiliensis巴西副球孢子LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Bartonella bacilliformis杆状巴尔通体LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Herba eupatorii佩兰PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Rhodococcus fascians香豌豆束茎病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Erysipelothrix spp丹毒丝属通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Taylorella spp.泰勒氏通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
操作流程:
1、您收到母细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)换用新鲜完全培养基继续培养。