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产品详情
  • 产品名称:外周血单核细胞

  • 产品型号:BH-0110666
  • 产品**:派瑞曼
  • 产品文档:
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简单介绍:
外周血单核细胞在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
详情介绍:

操作流程:

1、您收到母细胞后,请按照以下方法进行操作:

取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;

4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏:

1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;

3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

4)换用新鲜完全培养基继续培养。

服务流程: 

1)客户提供:目的细胞具体信息;

2)操作过程:细胞复苏培养,细胞发货;

3)交付内容:细胞系/细胞株,以及细胞使用说明书。

产品名称

外周血单核细胞

规格

详见说明书

货号

BH-0110666

英文简称:PBMC 细胞

产品名称:外周血单核细胞

规格:外周血单核细胞

形态特性:1640

生长特性:悬浮

特征特性:

培养条件:

传代方法:

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 


实验要点及说明

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 

2.所使用的盖玻片应该为玻璃**,并经过铬酸洗液处理; 

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。


注意事项:

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。

3. 静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4. 贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。

5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。

6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制,

7. 因为细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

罗汉果甜苷III(95%)  mogroside III 130567-83-8 10mg 100次 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 Dual Luciferase Assay Kit -20℃或-80℃避光保存

岩黄连碱 dehyrocaridine 83218-34-2 10mg 100次 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒 Firefly Luciferase Assay Kit  -20℃或-80℃避光保存

蔗果四糖 Fungitetraose Trihydrate 13133-07-8 20mg 100次 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 Renilla Luciferase Assay Kit   -20℃或-80℃避光保存

去甲二氢愈创木酸 Nordihydroguaiaretic acid 500-38-9 20mg 1mL 萤火虫荧光素 Luciferin -20℃避光保存

意苡素 Coixol  53-91-2 20mg 25mg 无内萤火虫荧光素 Endo-free Luciferin -70℃干燥避光保存

桔梗皂苷E Platycoside E 237068-41-6 5mg 1mL ATP溶液,1 mM ATP Solution,1 mM -20℃保存

柴胡皂苷B4 Saikosaponin B4 58558-09-1 5mg 10mL ONPG溶液,10mg/mL O-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside -20℃干燥避光保存

柴胡皂苷E Saikosaponin E 64340-44-9 5mg 300次 β-半乳糖苷酶检测试剂盒 β-galactosidase Assay Kit   -20℃或-80℃避光保存

竹红甲素 HYPOCRELLIN A 77029-83-5 10mg 200次 ADP/ATP发光法  活力检测试剂盒 ADP/ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit -20℃或-80℃避光保存

β-桉叶醇  β-Eudesmol 51317-08-9 10mg 200次 ATP发光法  活力检测试剂盒 ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit  -20℃或-80℃避光保存

3-乙?;?b-蜕皮甾酮 20-hydroxyecdysone 3- acetate 22961-68-8 10mg 200次  ATP检测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

2-乙酰基-b-蜕皮甾酮 20-hydroxyeedysone 2- acetate 19536-25-5 10mg 50 T ATP酶测试盒(组织及  膜不需高速离心) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

萝卜硫苷 Glucoraphanin 21414-41-5 10mg 50 T ATP酶测试盒(组织及  膜需高速离心) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存

外周血单核细胞Duck Hepatitis Virus(DHV)鸭肝炎病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Rhizoma sparganii三棱染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Radix pulsatillae白头翁PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Ochroconis gallopava奔马赭霉探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Avian Metapneumovirus(aMPV)禽偏肺病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒6型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

小鼠线粒体DNA通用PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 1-3天

Exocarpium benincasae冬瓜皮LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Radix scutellariae黄芩PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Haemophilus agni阿古尼嗜血杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Clostridium perfringens types B产气荚膜梭状芽孢杆B型LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Rhizoma et radix notopterygii羌活PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Porcine rotavirus 猪轮状病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

 

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