服务流程： 

（1）客户提供：目的细胞具体信息；

（2）操作过程：细胞复苏培养，细胞发货；

（3）交付内容：细胞系/细胞株，以及细胞使用说明书。

英文简称：SHEE细胞

产品名称：永生化食管上皮细胞

规格：食管；上皮细胞

形态特性：1640

生长特性：贴壁

培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

实验要点及说明 ：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。

3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4. 贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。

5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。

6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制，

7. 因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

20次 Southern Marker Oligo（生物素）  　500mg 硫酸庆大霉素 Gentamycin Sulfate 4℃保存

20次 Southern Marker Oligo（DIG）  　250mg 赤霉素 Gibberellic Acid (GA3) 室温干燥保存

50ug 大片段DNA分子量标准 Large DNAMETER 4℃保存数周（长期请存放-20℃）　3000U 谷氨酸脱氢酶 GLDH   -20℃保存

50次 脉冲电泳Marker（酵母染色体PFG）  　1g 姬姆色素染料 Giemsa Stain 室温保存

50次 脉冲电泳Marker（Lambda LadderPFG）  　1g γ- 球蛋白 ( 牛血 ) γ-Globulins From Bovine Blood      -20℃保存

50次 脉冲电泳Marker（低范围PFG）  　10g D- 氨基葡萄糖盐酸盐 D-Glucosamine Hydrochloride  室温干燥保存

100uL 超螺旋DNA分子量标准  　250g D- 无水葡萄糖 D-Glucose,Anhydrous     室温保存

30次 miRNA电泳分子量标准 miRNA Marker -20℃保存　10Ku 葡萄糖氧化酶 Glucose Oxidase -20℃保存

0.1mL 微量RNA助沉剂 RNADOWN -20℃保存　500mg 葡萄糖 -6- 磷酸二钠 D-Glucose 6-Phosphate Disodium Salt Hydrate -20℃保存

0.1mL 微量DNA助沉剂 DNADOWN -20℃保存　1g D- 葡萄糖 -1- 磷酸二钠 D-Glucose-1-Phosphate Disodium Salt Hydrate 4℃保存

1mL DNA级Acryl助沉剂 Acryl DNADOWN 4℃保存　100UN β- 葡萄糖苷酶 β-Glucosidase   4℃保存

1g 彩色Acryl助沉剂 Color Acryl DNADOWN 4℃保存　100g L- 谷氨酸 L-Glutamic Acid 室温密封保存

1g 分子生物学级糖原干粉 Glycogen Powder 常温　25g L- 谷氨酸钠 L-Glutamate Sodium    室温保存

永生化食管上皮细胞HRPT2/CDC73/Parafibromin  甲状旁腺功能亢进蛋白2抗体（  分裂周期73） 0.2ml

5-HTR1A  5-羟色胺受体1A抗体 0.1ml

THOC2  转录因子THOC2抗体 0.2ml

VEGF  血管内皮生长因子抗体 0.1ml

DNA Ligase IV/LIG4  DNA连接酶4抗体 0.2ml

5-HTR1B  5-羟色胺受体1B抗体 0.1ml

5-HTR2B  5-羟色胺受体2B抗体 0.1ml

5-HTR2A  5-羟色胺受体2A抗体 0.1ml

5-HTT  5-羟色胺转运蛋白抗体 0.1ml

5-HTR3  5-羟色胺受体3抗体 0.1ml

5-HTR4  5-羟色胺受体4抗体 0.1ml

5 lipoxygenase/ALOX5  5-脂氧合酶抗体 0.1ml

Phospho-5-Lipoxygenase(Ser271)  磷酸化5-脂氧合酶抗体 0.1ml

操作流程：

1、您收到母细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）换用新鲜完全培养基继续培养。