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操作流程:
1、您收到母细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)换用新鲜完全培养基继续培养。
服务流程:
(1)客户提供:目的细胞具体信息;
(2)操作过程:细胞复苏培养,细胞发货;
(3)交付内容:细胞系/细胞株,以及细胞使用说明书。
产品名称 |
大鼠脂肪间充质干细胞 |
规格 |
详见说明书 |
货号 |
BH-0110830 |
英文简称:RAMSCs细胞
产品名称:大鼠脂肪间充质干细胞
规格:脂肪间充质干细胞
形态特性:DMEM
生长特性:贴壁
特征特性:
培养条件:
传代方法:
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
实验要点及说明 :
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制,
7. 因为细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
1000次 改良Lowry法蛋白定量试剂盒 Enhanced Lowry Assay Kit 常温保存,BSA标准需要-20℃保存 1瓶 LL/2(LLC1) 株 LL/2(LLC1) 低温运输和保存
2×0.5mL 蛋白酶抑制剂混合液 Protease Inhibitor Cocktail -20℃保存 1瓶 LLC-MK2 株 LLC-MK2 低温运输和保存
1mL 蛋白磷酸酶抑制剂混合液1 Phosphotase Inhibitor Cocktail 1 4℃保存 1瓶 LLC-PK1 株 LLC-PK1 低温运输和保存
5mL 蛋白磷酸酶抑制剂混合液2 Phosphotase Inhibitor Cocktail 2 4℃保存 1瓶 LLC 株 LLC 低温运输和保存
10mL 蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Bacteria -20℃保存 1瓶 LNcap cloneFGC(GFP) 株 LNcap cloneFGC(GFP) 低温运输和保存
1mL 哺乳动物蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Mammal -20℃保存 1瓶 LNcap cloneFGC 株 LNcap cloneFGC 低温运输和保存
1mL 植物蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Plant -20℃保存 1瓶 LNCaP 株 LNCaP 低温运输和保存
5mL 酵母蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Yeast 4℃保存 1瓶 L-O2 株 L-O2 低温运输和保存
10mL His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for His-tagged Protein -20℃保存 1瓶 LOVO 株 LOVO 低温运输和保存
1mL 组织培养基蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Tissue Culture -20℃保存 1瓶 low passage 株 low passage 低温运输和保存
25Inh.U α2巨球蛋白 α2-Macroglobulin -20℃保存 1瓶 CL-187[LS180] 株 CL-187[LS180] 低温运输和保存
5mL AEBSF溶液,10mg/mL AEBSF Solution -20℃保存 1瓶 Ls-174-T 株 Ls-174-T 低温运输和保存
1mL 抗凝血酶Ⅲ,10mg/mL Antithrombin III Solution 4℃一周内稳定 1瓶 LTEP-a-2 株 LTEP-a-2 低温运输和保存
大鼠脂肪间充质干细胞phospho-Ret/HSCR1(Tyr1062) 磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体RET抗体规格: 0.1ml
LDHD 乳酸脱氢酶D抗体规格: 0.2ml
ENO1+ENO2+ENO3 神经元,肌肉特异性烯醇化酶抗体规格: 0.2ml
AKR1B10 醛糖还原酶相关蛋白质抗体规格: 0.2ml
HBAB/AKR1C2 胆汁酸结合蛋白DDH2抗体规格: 0.2ml
Acylglycerol Kinase 甘油酯激酶线粒体抗体规格: 0.2ml
CYP2W1 色素P450 2W1抗体规格: 0.2ml
CHDH/Choline dehydrogenase 胆碱脱氢酶抗体规格: 0.2ml
ENPP2 核苷酸焦磷酸酶2抗体规格: 0.2ml
FUT8 岩藻糖转移酶8抗体规格: 0.2ml
Hepsin 跨膜蛋白酶丝氨酸1抗体规格: 0.2ml
SCCA/SERPINB4 丝氨酸蛋白酶抑制剂B4抗体(鳞状 癌抗原)规格: 0.2ml
SULT1A1 芳基磺基转移酶1抗体规格: 0.2ml