操作流程：

1、您收到母细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）换用新鲜完全培养基继续培养。

服务流程： 

（1）客户提供：目的细胞具体信息；

（2）操作过程：细胞复苏培养，细胞发货；

（3）交付内容：细胞系/细胞株，以及细胞使用说明书。

英文简称：HRC99细胞

产品名称：直肠腺癌细胞（中分化）

规格：直肠腺癌

形态特性：1640

生长特性：贴壁

培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

实验要点及说明 ：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。

3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。

4. 贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。

5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。

6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制，

7. 因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

250mL 重蒸酚 Phenol 室温避光保存　2 ug pQE-80 pQE-80 低温运输，-20℃保存

10g L- 苯丙氨酸 L-Phenylalanine 室温干燥避光保存　2 ug pQE-80L pQE-80L 低温运输，-20℃保存

1g 苯 Phenylmethyl Sulfonyl Fluoride（PMSF） 室温保存　2 ug pQE-9 pQE-9 低温运输，-20℃保存

100mg 6- 磷酸葡萄糖钡盐 6-Phosphogluconic Acid Barium salt Hydrate 室温干燥避光保存　2 ug pQE-Tirs pQE-Tirs 低温运输，-20℃保存

100g 植物凝胶 Phytagel (Gellan Gun) 室温保存　2 ug pQETirs-system pQETirs-system 低温运输，-20℃保存

100mL 植酸 Phytic Acid 室温阴凉保存　2 ug pRARE pRARE 低温运输，-20℃保存

10g 植酸钠 Phytic Acid Sodium Salt Hydrate 室温阴凉保存　2 ug pRAV-flag pRAV-flag 低温运输，-20℃保存

25g 猪胆盐 Pig Bile Salts 室温保存　2 ug pBaBe-puro pBaBe-puro 低温运输，-20℃保存

10g 1,4- 二乙磺酸 1,4-Piperazinediethane Sulfonic Acid  (PIPES) 室温干燥保存　2 ug pRC pRC 低温运输，-20℃保存

100mL 聚乙烯亚胺 Poly(Ethyleneimine) Solution 室温保存　2 ug pRC/CMV pRC/CMV 低温运输，-20℃保存

25mL 聚乙二醇溶液 Poly(Ethylene Glycol Solution) 4℃保存　2 ug pRetro-Off pRetro-Off 低温运输，-20℃保存

1g 多聚半乳糖醛酸钠盐 Polygalacturonic Acid Sodium Salt 室温保存　2 ug pRetro-On pRetro-On 低温运输，-20℃保存

25mg 多聚 -L- 赖氨酸 (15-30 万 ) Poly-L-Lysine -20℃保存　2 ug pRetro-on-EGFP pRetro-on-EGFP 低温运输，-20℃保存

直肠腺癌细胞（中分化）CDC2L5    分裂周期2样蛋白激酶5抗体规格: 0.2ml

PICK1  蛋白激酶Cα相互作用蛋白1抗体规格: 0.2ml

INCA1  INCA1蛋白抗体规格: 0.2ml

MS4A3/CD20L  CD20样蛋白抗体（造血干  4跨膜蛋白3）规格: 0.2ml

Amylin  糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体规格: 0.1ml

SPDYA    周期G2/M期快速诱导蛋白SPDYA抗体规格: 0.2ml

phospho-FRS2(Tyr436)  磷酸化成纤维  生长因子受体底物2抗体规格: 0.1ml

ASP/AKAP associated Sperm Protein  精子相关蛋白AKAP抗体规格: 0.2ml

AKAP6  蛋白激酶A锚定蛋白6抗体规格: 0.2ml

BRSK1  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SAD-B抗体规格: 0.2ml

CERK  神经酰胺激酶CERK抗体规格: 0.2ml

CLK2    分裂周期样激酶2抗体规格: 0.2ml

CLK3    分裂周期样激酶3抗体规格: 0.2ml