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英文简称
规格
货号
LS174T:LS174T
1×106
P-X827
产品详情：
生长特性
贴壁细胞
细胞形态
上皮细胞样
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养方案A（默认）
生长培养基:
MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S
培养条件:
气相：空气，95%；CO2，5%, 温度：37℃
推荐传代比例 1:2-1:4
推荐换液频率 2-3次/周
参考资料(来源文献)
背景描述 LS 174T细胞是LS 180细胞的胰dan白酶化变种。LS 174T细胞比亲本更易传代，像LS 180细胞一样**大量的癌胚抗原(CEA)。电镜研究表明，LS 174T细胞有丰富的微丝和细胞质粘液素液泡。LS 174T细胞直肠抗原3阳性；p53抗原表达阴性，但mRNA表达阳性。LS 174T细胞角蛋白染色阳性；LS 174T细胞癌基因c-myc、N-myc、H-ras、N-ras、Myb和fos的表达呈阳性；癌基因k-ras和sis的表达未做检测。
年龄（性别）
女性；58岁
组织来源
直肠；结直肠腺癌
细胞类型
肿瘤细胞
肿瘤类型
肠癌细胞
生物等级 BSL-1
倍增时间 ~30-40 hours
致瘤性 Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100%
frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).
抗原表达情况 serologically defined colon cancer antigen 3; Homo sapiens,
expressedHLA A2, B13, B50; Blood Type O
基因表达情况 carcinoembryonic antigen (CEA), interleukin 10 (IL-10), interleukin
6 (IL-6), mucin The production of CEA in the ATCC seed stock was 1944 ng per
10^6 cells in 10 days.
保藏机构 ATCC; CL-188 ATCC; CCL-188BCRC; 60053 DSMZ; ACC-759 ECACC; 87060401
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10?~1×10?个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10?~1×10?个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
公司正在出售的产品：
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猴三碘甲状腺原氨酸(T3)elisa分析检测试剂盒 |
伴肌动蛋白抗体 |
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T3 ELISA kit |
脱中胚蛋白抗体 Anti-TBR2/Eomes |
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人肥大细胞类羧肽酶elisa分析检测试剂盒 |
Gastrokine 2 |
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HumanMastCellCarboxypeptidaseELISAKit |
Gastrokine 2蛋白抗体 |
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磷酸化p21激活激酶3抗体 Anti-phospho-PAK3(Ser139) |
Nebulin |
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八聚体结合转录因子6抗体 Anti-OCT6 |
phospho-GATA3 (Ser115) |
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神经外营养蛋白2抗体 |
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磷酸化GATA结合蛋白3抗体 |
NXPH2 |
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大鼠白血病抑制因子(LIF)elisa分析检测试剂盒 |
腺苷酸环化酶激活肽受体-II/血管活性肠肽受体-II抗体 Anti-VIP receptor 2/VPAC2 |
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LIF ELISA Kit |
肾小球细胞粘附分子受体抗体 Anti-Nephrin |
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人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)elisa分析检测试剂盒 |
环指蛋白39抗体 Anti-RNF39 |
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HumanTIMP-2ELISAKit |
转录因子相关蛋白TRRAP抗体 Anti-TRRAP |
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人Ephrin-B2(EFNB2)elisa检测试剂盒 |
小鼠淀粉样前体蛋白(APP)elisa检测试剂盒 |
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MAYER苏木素复染试剂盒 |
LS174T人结直肠腺癌细胞大鼠Slit源物1(Slit1)elisa检测试剂盒 |
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急性细胞性白血病1抗体 |
趋化素样因子超家族成员5抗体 |
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KMT2A |
CKLFH5 |